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ELISA实验标曲做不好是什么原因
作者:管理员    发布于:2017-09-20 11:02:08    文字:【】【】【
摘要:ELISA实验标曲做不好是什么原因,孙老师在金益柏购买了elisa试剂盒,因为刚接触elisa实验,还是属于新手,研究大鼠干扰素相关指标的实验,做完大鼠γ干扰素ELISA实验后反应标准曲线的梯度都不好。刚加完显色剂的时候梯度还算明显,但是显色比较浅,随着时间延长(大概6、7分钟)以后梯度就不明显了。终止反应后测得的值梯度就没有了。
  ELISA实验标曲做不好是什么原因,孙老师在金益柏购买了elisa试剂盒,因为刚接触elisa实验,还是属于新手,研究大鼠干扰素相关指标的实验,做完大鼠γ干扰素ELISA实验后反应标准曲线的梯度都不好。刚加完显色剂的时候梯度还算明显,但是显色比较浅,随着时间延长(大概6、7分钟)以后梯度就不明显了。终止反应后测得的值梯度就没有了。


  ELISA实验标曲做不好是什么原因:


  1、刚加完显色剂时梯度明显:显色液可能是从高浓度向低浓度孔加的。


  2、酶浓度太高,导致最后显色结果都是高的


  3、包被-酶标系统不匹配或者酶标的非特异反应太强,或者酶标仪读数范围不够,


  4、样本中有能够催化底物的物质,没洗下来。


  5、建议:包被、酶标重新做梯度,先用较低的浓度把梯度摸索好,然后再优化灵敏度,最后调出所需的灵敏度、线性范围


  6、有条件的话,可以把酶免的蛋白系统移植到板式化学发光上,加完底物三分钟读数。


  7、蛋白系统灵敏度够的话,显色十分钟就差不多了。


  8、酶是自己标的这种情况的,HRP比例不要太高。
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