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流式细胞术检测细胞周期
作者:管理员    发布于:2018-08-06 11:24:38    文字:【】【】【

注意:所有操作在冰上进行。

1.收集细胞到15ml的管中,离心。再用10-12mL PBS洗细胞
2.沉淀细胞并重悬。
3.用5mL PBS洗细胞,重复步骤2。
4.在1mL 固定溶液里彻底重悬细胞。(1×PBS;0.5% Paraformaldehyde多聚甲醛,溶液在-70℃冻存,只能冻溶一次。该步骤用于GFP样品))
5.孵育不超过60 min。
6.离心
7.用10-12mL PBS洗细胞,再用5ml洗细胞,离心
8.加300ul含8%的小牛血清重悬打匀
9.加5ml70%乙醇,逐滴加入,放-20度下午测
FCM分析细胞周期的方法是:收集细胞,PBS洗涤,70%冰乙醇固定,加入PCB溶液室温低渗处理后,离心去上清,加入RNaseA消化后,加入PI.上流式检测.
pc缓冲液是0.2 mol Na2HPO,192 ml, 0.1mol柠檬酸8ml 0.2 M ph=7.8,用作DNA抽提缓冲液,主要是使小的DNA片断出细胞。这样会更利于检测调亡峰。

Tips:

1,过夜!-20度!几个月没问题,超过半年没试过!
2,就是PC buffer!不能代替!抽提和破膜是两个概念!抽提时间30min,有的书上要冰浴,有的不要

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