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DNA细胞转染实验步骤
作者:管理员    发布于:2018-08-16 09:03:44    文字:【】【】【

下面以Entranster-H4000,DNA转染试剂为例,简要说明DNA细胞转染实验步骤
1.提前一天细胞铺板
提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。
2.转染过程
⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。
注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。
⑵将2μl的EntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。
⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。
⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。
注意:①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加抗生素。
⑸培养4-6小时后更换培养基,继续培养24-48小时。
注意:①如细胞没有毒性等不良情况,转染后4-6小时可不必更换培养基。
重要提示
1.本品在转染过程中可以添加抗生素,抗生素的添加与否不影响转染效率和毒性。
2.如转染后需要用Trizol提取RNA,建议转染后6小时换液。

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