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数字PCR技术

 
商品编号:
JSY-005
品牌:
金益柏
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产品介绍Product Description

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分类:生化检测

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一、服务介绍

数字PCRDigital PCRdPCR),是继一代普通PCR、二代荧光定量PCR之后的第三代PCR技术。相较于qPCR,数字PCR可直接数出DNA分子的个数,可以对起始样品绝对定量,是一种全新的核酸分子绝对定量技术。

dPCRqPCR方法相比,本方法无需核酸标准品,定量的结果不再依赖于 Ct 值;又兼具qPCR方法的优点,且结果的精确度、准确性和灵敏度更佳。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等,在环境微生物和病原体基因的检测、遗传病、无创产前筛查、NGS数据验证等方面将具有更广阔的应用前景。

二、实验原理

通过把稀释到一定浓度的DNA分子分布在一定数目的微滴中,使大部分微滴中的DNA分子数目为10,然后通过PCR扩增和荧光信号的累计读取阳性微滴数目,有荧光信号的微滴判读为1;没有荧光信号的微滴判读为0,再根据泊松分布计算出样本中的DNA分子数。

三、服务流程

1、样品DNA(或RNA)提取及模板制备

2、引物探针设计合成

3PCR扩增

4、检测微滴

5、分析数据、显示结果

四、客户提供

样本(DNA,RNA,血液,组织,石蜡切片等),样本的物种信息,基因信息(NCBI登录号);探针选择Taqman还是MGB

血液样品:样品为EDTA抗凝或枸椽酸钠抗凝,样品量大于0.5 mL,样品采集后于-20°C-80°C保存,低温(≤-4°C)运输。

组织样品:样品可以为新鲜组织(最好-80°C保存)或石蜡包埋的组织,也可以是95%乙醇中固定的组织,组织量大于100 mg。组织样品用干冰运输。

DNA样品:纯度OD260/280 比值为 1.6-1.8,浓度≥10 ng/μL,体积≥20 μL

RNA样品:纯度OD260/280 比值为 1.8-2.0,浓度≥20 ng/μL,体积≥20 μL。需要干冰运输。

五、交付内容

实验报告:包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。

周期:1个月左右

电话:025-86228208 | 传真:025-86228208 | 电子邮件:lixlae@126.com
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