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透射电镜检测

 
商品编号:
JSY-011
品牌:
金益柏
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产品介绍Product Description

规格:

分类:生化检测

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用途:

注意事项:

一、服务介绍
         透射电子显微镜(Transmission Electron MicroscopeTEM)是使用最为广泛的一类电镜。通过发射电子束从而穿过超薄的样品,同时与样本相互作用,既而形成图像。透射电镜具有分辨率高和放大倍数高的优点。其分辨率为0.10.2nm,放大倍数为几万到几十万倍。目前透射电镜已经广泛的应用到癌症研究,病毒学研究,微生物学,细胞学研究等生物领域。

二、实验原理
透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向,从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关,因此可以形成明暗不同的影像。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备超薄切片(通常为50100 nm)。要在机体死亡后的数分钟内取材,组织块要小(1mm3以内),常用戊二醛和锇酸双重固定,包埋介质包埋,用超薄切片机切成薄片,再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。

三、实验流程

1.取材

2.固定

3.脱水

4.包埋

5.固化

6.超薄切片机切片(50-60 nm)

7.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色

8.透射电镜观察,拍片

四、客户提供

组织块、细胞等

五、公司提供

基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析

实验周期2-3

六、透射电镜取材注意事项

取材是电镜样品制备的第一步,也是十分重要的一步。其操作成功与否直接关系到整个实验的成败。 为了得到好的结果,请务必认真做好最关键的第一步取材。因取材不规范导致实验失败本公司概不负责!取材基本要点:快(1min)、冷(4 ℃)、小(1mm 3 )、净(无杂质)、准(部位准确)

动植物 组织取材流程及要求:

取材流程: 动物麻醉后,快速取出需要检测的组织,将组织切成 1 mm 3 左右小块,固定于 2.5%戊二醛固定液 4℃过夜后快递。植物组织除麻醉外,其他操作相同。
取材要求:
1.定位准确:解剖水平的准确定位误差应≤1mm。注意各组实验动物取材区位及方位的一致性和代表性。
2.操作迅速:组织离开活体后,以最快的速度浸入戊二醛固定液,0.5 min 或最多2 min。事先准备好 l 1.5ml  尖头 P EP  管里面盛满预冷的戊二醛固定液。
3.标本尺寸大小:组织块大小需要在 1 mm 3 左右,样品太大会导致样品固定不充分。(提示:把较大标本块修整成符合要求的颗粒时,须事先准备一个蜡盘,滴入戊二醛固定液,把标本浸在液滴中修整,确认每个小标本颗粒都包含需要的结构内容,用牙签挑出 3~5 粒标本,放入 l 1.5ml  尖头 P EP  管。)

4.保持低温环境:为降低自溶酶活性,最好在 4℃低温条件下取材,容器和器械预冷;将修整好的标本块放入戊二醛固定液后,普通 4℃冰箱保存。细胞取材流程及要求

取材流程: 细胞直接刮下,细胞悬液离心,弃上清,PBS 清洗 2 次,离心成团,加入 2.5%戊二醛固定液 4℃过夜后快递。悬浮细胞、菌液可直接视为细胞悬浮液操作。

固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到 PBS 中,后续操作一致。
取材要求:
1.确认细胞数量充足(6cm 或 10cm 皿长满),离心后在 ep 管中 绿豆大小;
2.新鲜配置的电镜专用 2.5%戊二醛固定液,PH 值 7.3-7.4;
3.贴壁细胞用柔软细胞划子轻轻刮起成细胞悬液,尽量不要反复来回刮;
4.把细胞悬液置入洁净 l 1.5ml  尖头 P EP  管;
5.选择合适的离心速度和时间离心,一般 1000rpm 至 3000rpm,5min 至 10min(转
速及洗的时间请根据具体情况具体分析,比较脆弱敏感的细胞,尽量低转速、短时间,
以细胞离心成团为准!S PBS  洗的时间过长,容易造成自噬假阳性);
6.取细胞团块,如致密团结即弃上清,注入新鲜 2.5%戊二醛固定液,4℃保存;
提示:
a.取离心好的细胞团块时,如细胞分散,可在离心管中注入约 5ul 血清后再次离心,至 EP 管底部出现致密细胞团块,即送电镜室。
b.细胞大小不同,最佳离心富集速率和时间不同。提前检索文献,避免反复离心损伤细胞。
需要客户提供的材料 :
1、按照标准方法取材固定的实验样本(固定在戊二醛固定液中的样品)。
2、透射电镜实验登记表,电子版发送到 2880647011@qq.com。
样本储存运输标准:
1、储存:样本取材后,4℃保存时间不超过 1 个月。
2、运输:泡沫盒+冰袋的方式运输, 样品用气泡膜包裹,避免标本瓶直接接触冰块,固定液充满 EP 管, 封口膜封口,以免邮寄途中液体渗出。
附表一:固定液配方(本公司有售)
A、 磷酸缓冲液的配方:
a 液:0.2M 磷酸氢二钠贮备液:
Na2HPO4·2H2O
或:Na2HPO4·7H2O
或:Na2HPO4·12H2O
加双蒸水至
b 液:0.2M 磷酸二氢钠贮备液:
17.81 克
26.83 克
35.82 克
500 毫升
NaH2PO4·H2O 13.8 克
或:NaH2PO4·2H2O 15.61 克
加双蒸水至 500 毫升
使用时将 A 液 40.5ml 和 B 液 9.5ml 混合成 0.2 磷酸缓冲液。(PH7.4)
B、 2.5﹪戊二醛固定液的配方:
0.2M 磷酸缓冲液 50ml
25﹪戊二醛溶液 (电镜专用) 10ml
加双蒸水至 100ml
戊二醛溶液最终浓度:pH 值 7.3-7.4


电话:025-86228208 | 传真:025-86228208 | 电子邮件:lixlae@126.com
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