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Elisa常见问题问答:

(1)问:小鼠乙酰胆碱Elisa试剂盒后期数据处理中空白的OD值有什么作用?

         答:可以将标准品和样本的OD值同时减去空白的值进行计算,或者都不减,保持同一水平就行。 

(2)问:那我们算出来的ACH含量为什么出现负值?

         答:说明个别样本的浓度很低,当浓度接近第6个点的时候,直线方程就有可能计算出负值。

(3)问:小鼠乙酰胆碱ELISA试剂盒,组织标本 切割标本后能用生理盐水稀释吗?还有稀释的倍数是多少?

         答:生理盐水也可以,加入量1:3。

(4)问:我想问一下,标准品浓度与标准品吸光度值之间是不是线性回归?检测出来的吸光度值很低一般都存在哪些原因?大部分在0.08左右 ?(大鼠5羟色胺(5-HT)Elisa试剂盒)

         答:是线性回归。检测出来的值比较低 ,样本、稀释、操作等,原因很多,但只要在可操作范围就行 。 

(5)问:做出来的结果:标准品的吸光度呈线性回归,但是样品的吸光度都和本体吸光度值接近,正常未予干预的大鼠血浆都基本没有5-HT 表达,这是什么原因?(大鼠5羟色胺(5-HT)Elisa试剂盒)

         答:样本、稀释、室控和机器操作等,原因都可能造成吸光度都和本体吸光度值接近,好像荧光法里面有种试剂盒可以检测滴度。

(6)问:Elisa试剂盒的使用的方法是什么啊?

         答:采用双抗夹心法 (目前暂行)

(7)问:一个孔需要多少量的血清?

         答:一个孔上样量10-50微升。

(8)问:未处理的样本我需要邮寄多少的量?

         答:每个孔需要100ul

(9)问:样本怎么保存?

         答:当天要用的样本保存4℃隔天样本-20℃(近期一个月左右要用的样本),长期保存样本-70℃(一年或者更长时间多久都可以用),避免反复冻融。

(10)问:EP管是什么管?

           答:离心管。

(11)问:收集血清的时候用什么管?

           答:普通离心管即可。

(12)问:96t可以检测多少个样本?48t可以检测多少个样本?

           答:96t标准的可以检测85个样本,其他有10个标准品孔,1个空白对照。96t单孔可以检测90个样,7个标准品控 1个空白对照。48t标准的可以检测37个样本,其他有10个标准品孔,1个空白对照。48t单孔可以检测40个样本,其他有7个标准品孔,1个空白对照。

(13)问:标准的检测85个样本的和单孔相比, 有什么好的地方吗?

           答:标准的检测又叫复孔检测,标准的检验重复性测的结果好,所以大家都叫复孔是标准的检测。

(14)问: 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ?

           答:要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后:板条和板架都是可拆卸的,可以再用之,前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。

(15)问:酶标包被版是酶标板吗?

           答:是的。

(16)问:请问植物茉莉酸和水杨酸检测的试剂盒,我们提取拟南芥的,一般取样量是多少?

           答:1-3g。

(17)问:大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA,大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5B),我发现试剂盒里缺少标准品稀释液,没有它我的实验无法进行,盒子里面有特殊稀释液是用来稀释样品的,但都没有标准品稀释液,我的样品已超出最低检测限,所以需要稀释标准品才行吗?

           答:特殊稀释液是用来稀释标准品的,特殊稀释液一般情况不用当样本浓度特别高是先用特殊稀释液稀释,标准品需要再稀释就也要用特殊稀释液。

(18)问:测出来的标准曲线值前面几盒都是0.98 才正常,后面怎么变成0.93了?

           答:某个点偏离大可以去掉,保留5个点

(19)问:是不是空白对照就是什么都不加?

           答:不加样本,不加样本稀释液,不加酶标试剂 其他都可以加。

(20)问:样本稀释液是配好的吗?

           答:样本稀释液是配好的

(21)问:样本稀释液可以用来直接稀释血清吗?

           答:可以,直接加40ul就可以。

(22)问:检测的时候需要在操净台中操作吗,还是在外面操作就可以了?

           答:要求不是很严格,根据自己实验室的设备而定,都可以。

(23)问:人和肽素(copeptin)Elisa,洗涤液是浓缩的,是一次配好,还是现配现用?

           答:浓缩的,现配现用。

(24)问:Elisa方法的不测人血小板第四因子里IgG抗体的滴度吗?

           答:Elisa不测滴度的,荧光法可以测。

(25)问:酶标板不平,影响结果吗?

           答:不影响结果的。

(26)问:小鼠TNF-α ELISA 我的标本是细胞,我想要测的结果:抑制TNF的产生  空白组、模型组、药物组,药物组要成梯度抑制TNF的产生、请问Elisa方法的可以测吗?

           答:细胞可以测 但要分组,得到相应的梯度值,计算结果。自己需要多查阅文献 。

(27)问:人睾酮(T)Elisa,人雌三醇(E3)Elisa,是用什么酶标记的?

           答:辣根酶标记的  标本里不能加叠氮化钠

(28)问:我测植物水杨酸,标本是烟草叶片怎么处理的?那上清液检测SA时,还需要用甲醇抽提吗?

           答:称取烟叶500mg,研磨成粉末状,加入5ml浓度为0.01mol,PH值为7.4的PBS溶液,充分匀浆,离心取上清液(3000-4000转,15分钟左右),分装保存,一般需要长期保存需放在-80度,或者液氮中,备用,不用加甲醇。

(29)问:没有做出标准曲线来,你知道什么原因吗?

           答:操作肯定有问题,做之前把标准品摇匀下。

(30)问:买同一个指标的几个盒子,用不用都做标准曲线?

           答:如果同一个指标买了3盒,建议每盒都做个标曲。同一个盒子 ,即使分几次用,做一个标曲也行了,因为数值不会偏差太大,差不多。

(31)问:那个特殊稀释液是做什么的?

           答:一般情况都不要用的,他的最大的用途就是稀释标准品。但是,现在标准品已经稀释好了,所以不需要用了。如果你需要更多的标准品的话,可以用他来稀释。

(32)问:你们的试剂盒什么成分是进口的 什么事国产的?板子酶标和抗体是国产的还是进口的?

           答:抗体、酶标试剂、酶标板都是进口的、其他试剂是国产 严格按照国际标准操作完成 呵呵 

(33)问:比如说我偶然发现只加样本稀释液的也出现浅黄色,这怎么解释呢?

           答:可能的原因是:洗板时有交叉感染。样本稀释液中本身有本底的一个较小的读数。也是ELISA的一个局限性,免疫的很多反应稀释液 洗涤液发挥了很重要的作用,不加的话效果不明显,但是加了以后有些成分可能有一部分的干扰作用,可以比较不同的厂家的盒子 都存在这些局限性的,但不影响最终的结果,ELISA严格的说就是一个半定量的方法。

(34)问:那标准品出现跳孔是怎么回事?

           答:你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ,做之前摇匀一下,肯定可以做好 。那是操作问题了 ,你可以再做一次的,之前也有客户出现过类似的问题,学生做了2次都没做好,后来老师自己做,就是摇匀了一下,其他操作都一样,标准曲线做的很完美。

(35)问:建议标准做复吗?

           答:标准品做复孔是最好的

(36)问:血清和肠道粘膜匀浆上清,可以用一个盒子吗?

           答:可以!

(37)问:36个样品,定96T的,可以测一个重复吧

           答:可以

(38)问:不同盒子里的孔下次能不能用?

           答:一个盒子有96孔和48的 要是真的用不完或标本不多的情况下,做点处理后在存放。

(39)问:什么叫点处理?

           答:板条和板架都是可拆卸的,可以再用之前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子,放到冰箱 2-8度保存。

(40)问:不同批的试剂能不能用?

           答:同样的盒子不同的批号或是同一个批号,也是不建议混用的。同样的盒子,分两次的结果应该是不一样的,但数据部应相差太大,应在可控制或接受范围。

(41)问:为什么不建议混用?

           答:不同批号的不可以混用 原因很简单若不同批号的混用的话 可能得出的结果不是您想要的 数据可能偏差较大

(42)问:测细胞内的蛋白的话怎样处理样本 ?

           答:ELISA实验前需对标本进行处理将目的蛋白释放出来,其他按常规方法处理即可。

(43)问:代测可以直接接受没有处理好的样品吗?

           答:可以

(44)问:每个肌肉和肝脏样本,最少需要多少克?

           答:1克就可以了。

(45)问:96T的一次用不完,40天以后再用,如何存放?

           答:标准品放-20度 ,其他放4度,并且板条要密封好。

(46)问:标曲做两个重复少不少?

           答:不少。

(47)问:试剂盒不同批次会对实验结果有影响吗?

           答:有一定的影响,但是影响不是很大。

(48)问:能不能直接用软件分析数据呢?

           答:可以,用EXCEL或者用SPSS等统计软件。

(49)问:是不是空白就是什么都不加吗?

           答:空白不加样本,不加样本稀释液 ,不加酶标试剂,其他都可以加。

(50)问:你们这个试剂盒要多少上样量?

           答:上样量没有什么限制, 每个孔的上样量是10ul。

(51)问:我两个空白孔一个啥都不加,一个加了后面的A液,B液还有终止液, 请问用哪一个?

           答:用加了A液,B液还有终止液的那个更加准确,因为样本都加过这些,可以排除相应的干扰。

(52)问:离心完以后用什么管子保存?

           答:离心完用EP管保存就可以。

(53)问:收集病人血液标本的时候用什么管?

           答:用普通的离心管收集就可以

(54)问:抗体和底物都是进口的吧?

           答:是的,底物就是TMB 进口的。

(55)问:测的是不同的物质为什么测的波长一样呢?

           答:ELISA的波长全是450, 这就是ELISA,不一样的话,那就是比色法了,不是ELISA。组织匀浆后就可以检测。

(56)问:说明书写要7个标准品是做什么用?

           答:7个标准品,只要6个,第七个是空白对照 。 

(57)问:抗凝剂可以用EDTA吗?或者加什么做为抗凝剂?

           答:可以,肝素或者EDTA。

(58)问:Elisa代测结果表格每组表达什么?

           答:S1-S5 代表 标准品第一个表格是吸光度 第二个是对应表 第三个是数据处理(是根据标准品那个线性关系出来的)第四个表最终结果是都乘以5得到的问:为什么×5?答:因为我们做的时候是10ul样本+40ul样本稀释液做的 问:那个U是代表什么?答:U是调零的,什么都不加。 

(59)问:为什么检测结果最终结果单位表达不一样?

           答:ng/ml是质量单位, pmol/L是浓度单位,一般是没法换算的,在采购试剂盒时请用户说明单位1ng/ml = 1000pg/ml。

 

 

 


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